Validación de un método dllme-hplc-uv para la cuantificación de Clorpirifos en orina humana sin diluir

Abstract

El clorpirifos es un organofosforado ampliamente utilizado en el sector agrícola, uso residencial y en campañas de control. Sin embargo, su exposición humana representa un problema relevante de salud pública debido a sus efectos neurotóxicos, y se asocia con miles de muertes al año en todo el mundo. La cuantificación de este compuesto en orina constituye una herramienta fundamental para la exposición humana, particularmente en escenarios de exposición reciente o intoxicación. No obstante, la complejidad de la matriz urinaria, la dilución de la muestra (lo que reduce la detectabilidad y provoca falsos negativos) y la dependencia de técnicas instrumentales de alto costo limitan su análisis en laboratorios con infraestructura convencional. En ese contexto, el objetivo del presente estudio fue validar un método analítico basado en extracción líquido-líquido dispersiva (DLLME) acoplada a Cromatografía Líquida de Alta Resolución con detección ultravioleta (HPLC-UV) para la cuantificación de clorpirifos en orina humana sin diluir, conforme a los criterios establecidos en la guía ICH Q2 (R1). Se optimizaron variables críticas de DLLME (pH, volumen de solventes, tiempos de vórtex, ultrasonicación, centrifugación y número de ciclos) para adaptarlo a orina humana sin diluir. Se implementó una prehumectación con metanol y tres ciclos consecutivos de extracción para maximizar la recuperación; la fase orgánica se liofilizó y se reconstituyó antes del análisis cromatográfico. El HPLC-UV se operó en columna C18, fase móvil MeOH: agua (80:20, v/v), flujo 1.5 mL/min, 40 ºC y detección 203 y 230 nm, con un tiempo de retención promedio de 9.61 min para clorpirifos. El método mostró especificidad adecuada, sin picos interferentes en blancos de orina procesados y linealidad entre 0.1-1.0 mg/L con R² = 0.9978. Las recuperaciones en orina fortificada fueron de 64% a 72%, con factores de enriquecimientos efectivos de 10.1 y 9.0. El LOD y LOQ en matriz se estimaron en 6.8 y 20.8 μg/L, comparables en orden de magnitud con algunos métodos LC-MS/MS para plaguicidas en orina. La repetibilidad mostró valores de %RSD de 6.93% y 7.23% para 1.0 y 0.5 mg/L respectivamente, y confirmando la adecuada precisión en el rango útil del método. En conclusión, el método DLLME fue validado conforme a ICH Q2 (R1) y demostró ser adecuado para cuantificar clorpirifos en orina humana sin diluir en el intervalo 0.5-1.0 mg/L sin necesidad de modificar la matriz biológica. Este método constituye una alternativa costo-efectiva, reproducible y accesible para apoyar al diagnóstico y la identificación de exposiciones elevadas a clorpirifos en laboratorios con infraestructura convencional.